編號(hào):DS-0003
雙染檢測(cè)試劑(抗小鼠IgG/HRP+抗兔IgG/AP)
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詳細(xì)信息:
分類: | 檢測(cè)系統(tǒng) |
子分類: | DS雙染試劑盒 |
規(guī)格: | 60測(cè)試/盒,120測(cè)試/盒 |
主要成分: | 試劑1 內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑 試劑2 即用型組合二抗(HRP標(biāo)記抗小鼠IgG+AP標(biāo)記抗兔IgG) 試劑3 顯色劑3A 顯色劑3B 試劑4 顯色劑4A 顯色劑4B |
檢驗(yàn)方法: | 1) 脫蠟和水化石蠟切片置于新鮮二甲苯中,2缸,浸泡10分鐘/缸;去除多余的液體后,置于無水乙醇中,2缸,浸泡2分鐘/缸;去除多余的液體后,置于95%乙醇中,1缸,浸泡2分鐘;去除多余的液體后,置于75%乙醇中,1缸,浸泡2分鐘;去除多余的液體后,蒸餾水沖洗,置于Ultra沖洗緩沖液中。 2) 抗原修復(fù) 高壓鍋中,加入EDTA抗原修復(fù)液,高火預(yù)熱;待修復(fù)液沸騰后將切片置于其中,并完全浸泡組織,蓋好鍋蓋,扣上壓力閥,高火繼續(xù)加熱;待限壓閥開始轉(zhuǎn)動(dòng)噴氣后調(diào)至中火,同時(shí)開始計(jì)時(shí)2.5分鐘;計(jì)時(shí)結(jié)束后離開熱源,放氣降壓后將高壓鍋移入冷水中冷卻;待鍋中液體冷卻至室溫后取出切片,Ultra沖洗緩沖液浸泡清洗2分鐘×3次。 3) 滴加試劑1 加入50μL的試劑1(內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑),室溫孵育10分鐘;蒸餾水洗2次后甩干液體,用免疫組化筆在距離組織周圍2-3mm處畫圈;Ultra沖洗緩沖液浸泡2分鐘×3次。 4) 根據(jù)檢測(cè)需要滴加50μL 組合一抗或空白對(duì)照試劑,37℃孵育60分鐘或2~8℃孵育過夜;Ultra沖洗緩沖液浸泡2分鐘×3次。 5) 滴加試劑2 滴加50μL 試劑2,37℃孵育30分鐘;Ultra沖洗緩沖液浸泡2分鐘×3次。 6) 滴加試劑3 滴加50μL試劑3,室溫孵育10-15min;Ultra沖洗緩沖液浸泡2分鐘×3次。 7) 滴加試劑4 滴加50μL試劑4,室溫孵育5-10min;自來水沖洗。 8) 復(fù)染 蘇木素染色液室溫染色30~60秒,自來水沖洗干凈,晾干。注意:需要控制蘇木素染色液的染色強(qiáng)度。顏色過淺或過深都會(huì)干擾顯色結(jié)果的觀察。 9) 水洗后返藍(lán) 10) 快速脫水、透明、中性樹膠封片。 11) 結(jié)果判讀 在光學(xué)顯微鏡下對(duì)染色后切片進(jìn)行觀察和結(jié)果判讀。 |