詳細(xì)信息：
| 分類(lèi)： | 分子病理 |
| 子分類(lèi)： | 原位雜交（地高辛標(biāo)記） |
| 規(guī)格： | 50測(cè)試/盒，100測(cè)試/盒，300測(cè)試/盒 |
| 檢驗(yàn)方法： | 1、 檢驗(yàn)所需儀器、設(shè)備：移液器、恒溫箱、雜交儀、計(jì)時(shí)器、孵育盒、染色架、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、洗瓶。 2、 試劑準(zhǔn)備： a) DAB顯色液需要在使用前配制。配制方法：在小試管中按 20 倍稀釋比例依次加入 DAB 底物緩沖液及 DAB 濃縮顯色液（棕褐色液體）混勻。配置好的 DAB 顯色液 2～8℃避光存放，24小時(shí)內(nèi)有效。 b) PBS 緩沖液需要先配制成溶液，再加入 0.01%體積的 Tween-20（1L 約加入2～3滴）。 3、 操作程序 a) 脫蠟 石蠟切片置于新鮮脫蠟液中，浸泡10分鐘×3 次；去除多余的液體后，置于無(wú)水乙醇中，浸泡3分鐘×3次；經(jīng)空氣干燥5～10分鐘。 b) 封閉 空氣干燥后的組織，根據(jù)大小，滴加 80~100uL封閉液，室溫避光孵育10分鐘，純水洗去封閉液后，梯度乙醇脫水（75%，95%。100%各2分鐘），空氣干燥。 c) 酶處理 空氣干燥后的組織，根據(jù)大小，滴加 80～100uL胃酶工作液，37℃孵育，根據(jù)不同組織類(lèi)型及切片厚度調(diào)整孵育時(shí)間5～30分鐘。棄去胃酶工作液后，梯度乙醇脫水（75%，95%，100%各2分鐘），空氣干燥。 d) 滴加探針或空白對(duì)照試劑 根據(jù)組織大小，組織上滴加5～10uL地高辛標(biāo)記的EBER探針或空白對(duì)照試劑，加硅化蓋玻片，橡膠水泥封邊。37℃雜交孵育2～4小時(shí)或過(guò)夜（原位雜交儀內(nèi)或濕盒內(nèi)）。 e) 去除雜交蓋玻片 小心去除橡膠水泥，將玻片浸入PBS緩沖液內(nèi)10分鐘，蓋玻片自然滑落（期間提拉玻片數(shù)次促進(jìn)蓋玻片滑落）。阻水筆畫(huà)圈。PBS緩沖液沖洗2分鐘×3次。 f) 滴加HRP標(biāo)記抗地高辛抗體 根據(jù)組織大小，滴加30～50uL HRP標(biāo)記抗地高辛抗體，37℃孵育30分鐘；PBS緩沖液沖洗2分鐘×3次。 g) DAB顯色 根據(jù)組織大小，加入適量新鮮配制的DAB顯色液，室溫孵育5～10分鐘，注意鏡下觀(guān)察顯色情況。 h) 復(fù)染 自來(lái)水沖洗，蘇木素染色液復(fù)染5～10秒；分化、沖洗返藍(lán)。 i) 脫水、透明、封片。 j) 閱片，陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞核。 4、 結(jié)果判定，染色結(jié)果須由有資質(zhì)的病理醫(yī)生對(duì)染色后的組織片在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察并進(jìn)行判讀。 預(yù)期用途： 用于原位雜交細(xì)胞組織上的核酸靶點(diǎn)的檢測(cè)。 |
