【斷據(jù)】2016年NordiQC B22輪Ki67測評簡介（UltraMAB抗體UMAB107喜獲推薦）

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2016-12-16 中杉金橋

在剛剛結(jié)束的NordiQC乳腺癌Ki67測評中，由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供的高敏感和特異性的自主研發(fā)品牌抗體Ki67（克隆號：UMAB107）取得了優(yōu)異的成績，并最終被NordiQC作為優(yōu)秀抗體進行了推薦。

此次測評所使用的標本除了三個細胞標本（不參與評分）外，還包括：

No.	材料	Ki67 proliferation index
1.	胰腺	< 1% 外分泌腺及導(dǎo)管上皮細胞
5.	肝臟	< 1% 肝細胞
6.	扁桃體	80-90%生發(fā)中心B細胞
7.	乳腺導(dǎo)管癌	20-30%
8.	乳腺導(dǎo)管癌	70-80%
9.	乳腺導(dǎo)管癌	5-10%

優(yōu)片評定標準如下：

• 80-90%生發(fā)中心B細胞（明區(qū)和暗區(qū)）和絕大多數(shù)的基底上層鱗狀上皮細胞呈現(xiàn)中等至強的異質(zhì)性細胞核染色；
• 胰腺外分泌腺和大的導(dǎo)管散在的上皮細胞呈現(xiàn)中等至強的異質(zhì)性細胞核染色；
• 在三個乳腺癌標本中呈現(xiàn)與所示ki67增值指數(shù)相符的中等至強的異質(zhì)性細胞核染色；
• 僅有小于1%的散在的肝細胞核染色；
• 所有標本無或僅有很微弱的背景和細胞質(zhì)染色。

有409家實驗室參加了本次測評，93%取得了優(yōu)良的成績。最常見導(dǎo)致染色不佳的原因包括：不適當?shù)目乖瓱嵝迯?fù)；一抗?jié)舛冗^低。同以往的Ki67測試相同，不佳的染色主要表現(xiàn)在太弱或假陰性，造成Ki67增殖指數(shù)（PI）下降。實際上所有的實驗室均可以證明像暗區(qū)生發(fā)中心B細胞這樣Ki67高表達的細胞，但是位于明區(qū)Ki67低表達細胞才是校準實驗步驟的最佳依據(jù)，對于這些明區(qū)B細胞的弱染色或假陰性染色可以直接影響到對于乳腺癌Ki-67增值指數(shù)的結(jié)果。有78%的不合格染色存在上述問題。另外，其它不合格的染色還包括伴背景染色的弱陽性、形態(tài)受損或過度復(fù)染。

本次測試一共有150家實驗室使用濃縮型抗體。已被證實具有良好特性的小鼠單抗MIB-1和兔單抗SP6依然是最為廣泛使用的抗體，也取得了良好的染色結(jié)果，但是新近問世的小鼠單抗BS4、GM001、K2和UMAB107亦可提供優(yōu)質(zhì)的染色結(jié)果。除外抗體因素，有效的抗原熱修復(fù)和對一抗的仔細校準是獲得良好結(jié)果的關(guān)鍵所在。檢測系統(tǒng)的選擇所占的權(quán)重并不重要，無論是二步法還是三步法聚合物檢測系統(tǒng)在一抗調(diào)整合適的基礎(chǔ)上均可獲得滿意的結(jié)果。

對于最為常用的小鼠單抗MIB-1，在來自Dako、Leica和Ventana的三大染色平臺上均可以獲得優(yōu)秀的成績。但是原因不明的是，MIB-1在Leica的Bond免疫組化平臺上較之其它兩個平臺結(jié)果遜色，盡管使用了靈敏的三步聚合物檢測系統(tǒng)，僅有31%的實驗室獲得了“優(yōu)秀”的成績，甚至有19%的實驗室被評為不合格。與之相對應(yīng)的是，在Dako免疫組化檢測平臺中上述兩組數(shù)據(jù)分別對應(yīng)的是80%和0%。從上傳提交的步驟上并不能給出出現(xiàn)這種差異的理由。

從本次測評并結(jié)合以往的Ki67測試來看，闌尾被推薦用于作為Ki67檢測的陽性和陰性對照，生發(fā)中心暗區(qū)幾乎所有的B細胞都必須為中等至強的細胞核染色，而明區(qū)的多數(shù)B細胞亦應(yīng)至少呈現(xiàn)弱至中等強度的細胞核染色，在套區(qū)B細胞絕大多數(shù)無染色。肝臟和胰腺可以作為補充性陰性對照，小于1%的肝細胞和胰腺外分泌腺上皮細胞應(yīng)為陽性（感染性和反應(yīng)性條件下可以產(chǎn)生Ki67增殖指數(shù)的升高，白細胞也可不明原因地出現(xiàn)微弱的細胞核染色反應(yīng)）。以上推薦與國際專家特設(shè)委員會已發(fā)表的指南中所推薦的對照一致。

總之，小鼠單抗BS4、GM001、K2、MIB-1、UMAB107和兔單抗30-9、SP6均被推薦用于Ki67的檢測，有效的抗原熱修復(fù)是必需的，同時在敏感性和形態(tài)的完好性之間要達到很好的平衡。

圖1 Ki67在扁桃體中的正確表達

圖2 Ki-67在胰腺中的正確表達

UltraMAB技術(shù)

UltraMAB技術(shù)是美國Origene集團公司獨家擁有的保證抗體高特異性和靈敏度技術(shù)。Origene公司擁有全球最大的cDNA克隆文庫，利用哺乳動物表達系統(tǒng)，已成功克隆出近2萬個最接近天然活性的人類已知功能蛋白，這就從根本上保證了生產(chǎn)抗體的最高敏感度。同時，Origene公司又把所有蛋白制作成蛋白芯片，用來檢測生產(chǎn)抗體的特異性。因此，UltraMAB技術(shù)可以保證生產(chǎn)抗體最高的靈敏度和特異性。